紫花苜蓿犕狊犠犚犓犢３３转录因子的 分离及遗传转化研究

更新时间:2015-11-20

【摘要】ＷＲＫＹ 转录因子是植物特有的转录因子，广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。但是对紫花苜蓿中ＷＲＫＹ转录因子的研究还较少。本研究从紫花苜蓿中克隆了一个ＷＲＫＹＩ类转录因子犕狊犠犚犓犢３３。该基因ＣＤＳ全长１５３６ｂｐ，编码５１２个氨基酸，结构分析显示犕狊犠犚犓犢３３包括两个ＷＲＫＹ 结构域和一个Ｃ２Ｈ２锌指结构（ＣＸ４ＣＸ２３ＨＸＨ），表明其属于ＷＲＫＹＩ 族ＷＲＫＹ 转录因子。亚细胞定位预测ＭｓＷＲＫＹ３３ 蛋白定位在细胞核。犕狊犠犚犓犢３３基因受盐、干旱和冷胁迫诱导，暗示基因可能参与了这些逆境胁迫的调控。构建原核表达载体ｐＥＴ犕狊犠犚犓犢３３，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 分析表明在大肠杆菌中表达了ＭｓＷＲＫＹ３３蛋白。扩增犕狊犠犚犓犢３３编码区ｃＤＮＡ，以ｐＢＩ１２１为基础载体，构建植物超表达载体ｐＢＩ１２１犕狊犠犚犓犢３３。采用农杆菌介导的愈伤组织培养法转化紫花苜蓿。利用狀狆狋Ⅱ基因引物和载体特异引物检测抗性苗呈阳性，表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。ｑＲＴ－ＰＣＲ 检测发现，犕狊犠犚犓犢３３基因在转基因株系中得到增强表达。本研究为进一步探索ＷＲＫＹ 转录因子基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础。

【关键词】 紫花苜蓿 犕狊犠犚犓犢３３ 转录因子 遗传转化　

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